In der Chemie ist Verdünnung der Vorgang, bei dem die Konzentration eines Stoffes in einer Lösung verringert wird. Kettenverdünnung ist die wiederholte Verdünnung einer Lösung, um den Verdünnungsfaktor schnell zu erhöhen. Dieses Verfahren wird normalerweise in Experimenten durchgeführt, die sehr verdünnte Lösungen mit hoher Genauigkeit erfordern. Zum Beispiel Versuche mit Konzentrationskurven im logarithmischen Maßstab oder Versuche zur Bestimmung der Bakteriendichte. Kettenverdünnungen werden häufig in wissenschaftlichen Experimenten wie Biochemie, Mikrobiologie, Pharmakologie und Physik verwendet.
Schritt
Methode 1 von 2: Durchführen einer Basisverdünnung
Schritt 1. Bestimmen Sie die geeignete Verdünnungslösung
Es ist sehr wichtig, die zur Verdünnung zu verwendende Flüssigkeit zu bestimmen. Viele Lösungen sind in destilliertem Wasser löslich, dies ist jedoch nicht immer der Fall. Wenn Sie Bakterien oder andere Zellen verdünnen, tun Sie dies auf einem Kulturmedium. Die von Ihnen gewählte Flüssigkeit wird für alle Kettenverdünnungen verwendet.
Wenn Sie Zweifel haben, welches Verdünnungsmittel Sie verwenden sollen, suchen Sie Hilfe oder schauen Sie im Internet nach. Suchen Sie nach Beispielen von anderen, die ähnliche Kettenverdünnungen durchgeführt haben
Schritt 2. Bereiten Sie eine Reihe von Reagenzgläsern mit 9 ml Verdünnungsmittel vor
Reagenzgläser werden für leere Verdünnungen verwendet. Geben Sie zuerst die unverdünnte Probe in das erste Röhrchen, dann führen Sie die Verdünnungen nacheinander mit den nächsten Röhrchen durch.
- Beschriften Sie alle verwendeten Röhrchen, bevor Sie mit der Verdünnung beginnen, damit Sie nicht verwirrt werden, wenn das Experiment läuft.
- Jedes Röhrchen wird mit 10 Verdünnungen gefüllt, beginnend mit dem Röhrchen, dessen Substanz nicht verdünnt wurde. Die Verdünnung im ersten Röhrchen beträgt 1:10, gefolgt von 1:100 im zweiten Röhrchen, 1:1000 für das dritte und so weiter. Bestimmen Sie die Verdünnungsmenge, die im Voraus durchgeführt werden muss, damit Sie die Verdünnungslösung nicht verschwenden.
Schritt 3. Bereiten Sie ein Reagenzglas mit mindestens 2 ml unverdünnter Lösung vor
Die zur Durchführung dieser Kettenverdünnung erforderliche Mindestmenge an zu verdünnender Lösung beträgt 1 ml. Wenn Sie nur 1 ml verwenden, bleibt keine unverdünnte Lösung zurück. Etikettieren Sie BLM für unverdünnte Lösungen.
Mischen Sie die Lösung gründlich, bevor Sie mit der Verdünnung beginnen
Schritt 4. Führen Sie die erste Verdünnung durch
1 ml der unverdünnten Lösung mit einer Pipette aus dem BLM-Reagenzglas entnehmen und in ein mit 1:10 beschriftetes Reagenzglas mit 9 ml Verdünnungsmittel füllen und gründlich mischen. Es befinden sich nun 1 ml der unverdünnten Lösung in 9 ml des Verdünnungsmittels. Somit wurde die Lösung um einen Verdünnungsfaktor von 10 verdünnt.
Schritt 5. Führen Sie die zweite Verdünnung durch
Für die zweite Verdünnung nehmen Sie 1 ml der Lösung aus dem 1:10-Röhrchen und geben sie dann in das 1:100-Röhrchen, das ebenfalls 9 ml des Verdünnungsmittels enthält. Stellen Sie sicher, dass die Lösung im 1:10-Röhrchen vollständig gemischt ist, bevor Sie sie in das nächste Röhrchen geben. Stellen Sie erneut sicher, dass die Verdünnung im 1:100-Röhrchen vollständig gemischt ist. Die Lösung aus dem 1:10-Röhrchen wurde im 1:100-Röhrchen 10-fach verdünnt.
Schritt 6. Fahren Sie mit diesem Verfahren fort, um Verdünnungen mit längerer Kette durchzuführen
Dieser Vorgang kann so oft wie nötig wiederholt werden, um die gewünschte Lösungskonzentration zu erhalten. In Experimenten mit Konzentrationskurven können Sie Kettenverdünnungen durchführen, um eine Reihe von Lösungen mit Verdünnungen von 1, 1:10, 1:100, 1:1.000 herzustellen.
Methode 2 von 2: Berechnung des Verdünnungsfaktors und der Endkonzentration
Schritt 1. Berechnen Sie das Verhältnis der letzten Verdünnung in der Kettenverdünnung
Das Gesamtverdünnungsverhältnis kann durch Multiplikation des Verdünnungsfaktors von jedem Schritt bis zum letzten Schritt bestimmt werden. Die mathematische Darstellung ist mit der Formel DT = D1 x D2 x D3 x … x D , DT ist der Gesamtverdünnungsfaktor und D ist das Verdünnungsverhältnis.
- Nehmen wir zum Beispiel an, Sie führen eine 4-fache Verdünnung von 1:10 durch. Setze den Verdünnungsfaktor in die Formel ein: DT = 10 x 10 x 10 x 10 = 10.000
- Der Verdünnungsfaktor im vierten Röhrchen dieser Kettenverdünnung beträgt 1:10.000. Die Konzentration der Substanz nach der Verdünnung ist 10.000 mal niedriger als vor der Verdünnung.
Schritt 2. Bestimmen Sie die Konzentration der Lösung nach der Verdünnung
Um die Endkonzentration einer Lösung nach einer Kettenverdünnung zu bestimmen, müssen Sie deren Anfangskonzentration kennen. Die Formel ist CEnde = CAnfang/D, CEnde ist die Endkonzentration der verdünnten Lösung, CAnfang die Anfangskonzentration der ursprünglichen Lösung ist und D das vorbestimmte Verdünnungsverhältnis ist.
- Beispiel: Wenn Sie mit einer Zelllösung beginnen, deren Konzentration 1.000.000 Zellen pro ml beträgt und das Verdünnungsverhältnis 1.000 beträgt, wie hoch ist die Endkonzentration der verdünnten Probe?
-
Mit der Formel:
- CEnde = CAnfang/D
- CEnde = 1.000.000/1.000
- CEnde = 1000 Zellen pro ml.
Schritt 3. Stellen Sie sicher, dass alle Einheiten gleich sind
Achten Sie bei jeder Berechnung darauf, dass die Einheiten am Ende der Berechnung immer gleich sind. Wenn die anfängliche Einheit Zellen pro ml ist, stellen Sie sicher, dass die Einheiten am Ende der Berechnung gleich bleiben. Wenn die Anfangskonzentration Teile pro Million (bpd) beträgt, muss die Endkonzentration ebenfalls in bpj-Einheiten angegeben werden.
